Imunoensaio do Dot-Blot baseado em bio-híbridos de anticorpos-nanocluster como tags para detecção de olho nu

Ensaios em papel, como o DOT-BLOT, mostram alta promessa de desenvolver dispositivos de teste no ponto de atendimento, atendendo aos requisitos garantidos sugeridos pela Organização Mundial da Saúde (acessível, sensível, específica, amigável, rápida e robusta, livre de equipamentos e entrega). Nesta técnica, as enzimas naturais são etiquetas convencionalmente empregadas para fornecer biorreceptores, como anticorpos com atividade catalítica para avaliação quantitativa. No entanto, suas limitações biomoleculares inerentes representam desafios significativos, incluindo restrições de custo e armazenamento. Propomos uma conjugação alternativa para anticorpos baseados em nanoclusters bimetálicos catalíticos e sua integração em um imunoensaio de papel colorimétrico tão simples. Os nanoclusters são compostos de ouro e platina e estão incorporados na estrutura de um anticorpo anti-coelho, integrando em um único componente os elementos de biorcognição e transdução necessários para o biossensing. A detecção é baseada nas propriedades catalíticas do NCS para oxidar um substrato cromogênico insolúvel, gerando um sinal visível na superfície do papel que pode ser analisado posteriormente para obter resultados quantitativos. Demonstramos a detecção de anticorpos contra o biomarcador de inflamação interleucina-6 com um limite de detecção de 200 ng ML-1. Os resultados experimentais revelam melhorias em termos de estabilidade em comparação com a peroxidase de rábano enzimático pure, mantendo a maior parte de sua atividade após um armazenamento equivalente a 6 meses a 4 ° C. Além disso, a incorporação do NCS na estrutura do anticorpo, em vez de conectá -los por meio de uma ligação covalente, fornece maior sensibilidade de 69,7 %. Este ensaio pode ser transferido para outros anticorpos específicos para detectar e quantificar outros analitos de interesse.